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Visão Geral

Resumo do Projecto

A Insónia Familiar Fatal (IFF) é uma doença de prião que provoca morte prematura, após o aparecimento de sintomas. Neste momento, não existem tratamentos e os mecanismos neuronais estão sub-explorados. Este projeto pretende fazer uma avaliação clínica completa e desenvolver um modelo neuronal in vitro, de forma a explorar estratégias terapêuticas, utilizando terapia génica e fármacos moduladores do ritmo circadiano, permitindo identificar novas abordagens terapêuticas.

Objectivos Principais

A FFI é uma doença priónica genética ultra-rara causada por mutações altamente penetrantes do gene da proteína priónica (PRNP) no códon 178. Clinicamente, é caracterizada por insónia progressiva, com hiperativação autonómica e motora. A idade de início varia entre os 36 e os 62 anos, com um desfecho fatal após 8 a 72 meses. Em termos de neurofisiopatologia, os pacientes com FFI apresentam perda bilateral grave de neurónios, com gliose reativa (8,9). Atualmente, não há cura para esse distúrbio e muito se desconhece sobre os mecanismos dessa doença.

Portanto, o diagnóstico da FFI apresenta desafios significativos devido à sua raridade e à variabilidade dos sintomas. Muitas vezes, requer uma combinação de avaliação clínica, testes genéticos para identificar a mutação PRNP e, às vezes, testes especializados (por exemplo, polissonografia). Apesar dos esforços contínuos de investigação, continua a existir uma necessidade urgente de desenvolver tratamentos eficazes para a FFI, dado o seu impacto devastador no bem-estar físico e mental dos pacientes.

Portanto, o nosso objetivo é aprofundar o conhecimento sobre a FFI, caracterizando exaustivamente a doença, desenvolvendo um modelo para ela e investigando possíveis abordagens terapêuticas por meio de:

1. Caracterização dos portadores da mutação da FFI:

Avaliação clínica: Realizar uma avaliação clínica abrangente dos portadores da mutação da FFI e respectivos controles, com foco nas manifestações neurológicas e nos parâmetros do sono.

Expressão dos genes do relógio biológico: Analisar a expressão dos genes do relógio biológico nas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de portadores da mutação FFI para compreender o seu potencial papel na patogénese da doença.

Avaliação lipidómica: Avaliar o perfil lipídico utilizando a lipidómica para identificar alterações lipídicas associadas à FFI.

2. Estabelecimento de um modelo humano da doença FFI:

Geração de culturas neuronais hipotalâmicas funcionais: desenvolver um modelo clinicamente relevante para estudar a fisiopatologia da FFI, gerando culturas neuronais hipotalâmicas funcionais derivadas de células de pacientes.

Avaliação dos ritmos circadianos: avaliar os ritmos circadianos dos neurónios hipotalâmicos, analisando a expressão dos genes do relógio e monitorizando características relacionadas com o sono, utilizando medições semelhantes ao EEG.

Acumulação da proteína priónica: investigar a acumulação e propagação da proteína priónica nas culturas neuronais para elucidar os mecanismos subjacentes à patologia da FFI.

Perfil metabólico: avaliar o perfil metabólico do modelo in vitro através da quantificação do conteúdo de gotículas lipídicas, fornecendo informações sobre a desregulação metabólica associada à FFI.

3. Aplicação de técnicas terapêuticas:

Edição genética CRISPR-Cas9: Utilizar a tecnologia CRISPR-Cas9 para corrigir a mutação do gene FFI em células derivadas de pacientes, com o objetivo de desenvolver uma nova abordagem terapêutica para a FFI.

Tratamento regulador do ritmo circadiano e dos príons: Explorar o uso de medicamentos reguladores do ritmo para prevenir ou inibir o acúmulo de príons, oferecendo estratégias terapêuticas potenciais para mitigar a progressão da FFI.

No geral, este projeto representa um esforço holístico e multidisciplinar que promove uma relação sinérgica entre avanços científicos e aplicações clínicas. Além disso, as metodologias sugeridas introduzem técnicas inovadoras cruciais para o avanço da pesquisa terapêutica centrada no ser humano.